W elektroforezie żelowej ośrodkiem, w którym przemieszczają się badane substancje, jest żel elektroforetyczny sporządzony z agarozy, poliakrylamidu lub agaru, uformowany w płytkę o długości od kilkunastu do kilkudziesięciu centymetrów i grubości od ułamka do kilku milimetrów. Kroplę analizowanej mieszaniny nanosi się do studzienki, czyli zagłębienia w żelu, które powstaje po wyciągnięciu tzw. grzebienia po zastygnięciu/spolimeryzowaniu żelu. Próbka po włączeniu zasilania migruje do żelu jako wąski prążek. W zależności od techniki, cały żel lub jego końce zanurzone są w przewodzącym prąd roztworze buforowym. Przebieg elektroforezy można monitorować, nanosząc (na osobnych ścieżkach lub razem z preparatem) specjalne barwniki lub cząsteczki kwasów nukleinowych (tak zwane markery) o znanej mobilności elektroforetycznej.
Elektroforezę najczęściej stosuje się do rozdzielania DNA, RNA lub białek wyekstrahowanych z komórek lub syntetycznych. Ma ona też zastosowanie jako jedna z technik pomiaru masy cząsteczkowej i badania polidyspersji polimerów syntetycznych.
Jeśli badaczowi zależy na ograniczeniu wpływu kształtu cząsteczek na szybkość ich migracji elektroforetycznej i ściślejszym powiązaniu ich ruchliwości z masą cząsteczkową, może badane substancje poddać denaturacji, na przykład detergentem dodecylosiarczanem sodu (w przypadku denaturacji białek), albo mocznikiem (w przypadku denaturacji DNA lub białek).
Elektroforeza pionowa
Rozdział odbywa się w żelu poliakrylamidowym (PAGE). Usieciowienie żelu zależy od stężenia akrylamidu i bisakrylamidu. Polimeryzacja żelu odbywa się w obecności nadsiarczanu amonu (APS) oraz N,N,N’,N’-tetrametyloetylenodiaminy (TEMED).
Aparaty (http://argentalab.pl/pionowe-aparaty-do-elektroforezy-owl-thermo-scientific/)
Standardowo zestaw zawiera: komory buforowe, szklane płyty, pokrywę, zestaw grzebieni i przekładki oraz kable zasilające.
Dla każdego modelu opcjonalnie dostępny jest system do wylewania żelu.
|
Model |
Wymiar żelu |
Rozdział |
Objętość buforu |
Cechy dodatkowe |
|
P81 |
10 x 10 cm |
X1 |
150 ml |
PAGE |
|
P8DS |
8 – 10 x 10 cm |
X2 |
300 ml |
2-DE / PAGE |
|
P9DS |
14 – 16 x 16 cm |
X2 |
550 ml |
2-DE / PAGE |
|
P10DS |
20 x 20 cm |
X 2 |
1250 ml |
EMSA |
|
S4S |
45 x 20 cm |
X1 |
800 ml |
SEQ |
|
S3S |
45 x 35 cm |
X1 |
950 ml |
SEQ |
Odczynniki
|
Nr kat produktu |
Nazwa |
Opakowanie |
|
|
Akrylamid/bisakrylamid |
|
|
BP1364-100 |
Acrylamide:Bis-Acrylamide 19:1 powder, DNase and RNase free, electrophoresis tested |
100 gr |
|
BP1368-100 |
Acrylamide:Bis-Acrylamide 37.5:1 powder, DNase and RNase free, electrophoresis tested |
100 gr |
|
BP1366-100 |
Acrylamide:Bis-Acrylamide 29:1 powder, DNase and RNase free, electrophoresis tested |
100 gr |
|
BP1408-1 |
Acrylamide:Bis-Acrylamide 29:1 solution 40%, DNase and RNase free, electrophoresis tested |
1l |
|
BP1406-1 |
Acrylamide:Bis-Acrylamide 19:1 solution 40%, DNase and RNase free, electrophoresis tested |
1l |
|
BP1410-1 |
Acrylamide:Bis-Acrylamide 37.5:1 solution 40%, DNase and RNase free, electrophoresis tested |
1l |
|
|
Promotory polimeryzacji |
|
|
42058 |
N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine, 99%, for biochemistry, For electrophoresis |
5/10/100/500 g/2,5 kg |
|
BP150 |
TEMED (N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine), electrophoresis tested |
20/100 g |
|
|
Składniki buforów |
|
|
T/P631 |
Tris(hydroxymethyl)methylamine hydrochloride, 'Tris-HCl', for biochemistry |
100/500 g/1 kg |
|
J67233 |
Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride, Molecular Biology Grade, 99+% |
100 g |
|
14050 |
Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99+%, for biochemistry |
500 g/1/2,5/10 kg |
|
32736 |
Tris(hydroxymethyl)aminomethane, 99.85%, for molecular biology, DNAse, RNAse and Protease free |
1/5 kg |
|
Tris base, DNase RNase protease free, electrophoresis tested |
500g/1/5/10/25 kg |
|
|
G/P460/53 |
Glycine, Buffer component for electrophoresis and blotting |
500 g |
|
BP381 |
Glycine |
500 g/1/5 kg |
|
BP2439-20 |
Tris-Glycine, 1X solution |
20 l |
|
BP1307-1 |
Tris-glycine 10X powder |
Aluminium pouch |
|
BP1306 |
Tris-glycine solution 10X, DNase RNase and protease free |
1/4 l |
|
BP1342-1 |
Tris glycine SDS 10X powder |
|
|
BP1398-92 |
SDS-PAGE Buffer mix, dry powder mix of Tris/Glycine/SDS, (Electrophoresis) |
92 g |
|
|
Markery |
|
|
BP3601-500 |
EZ-Run™ Prestained Protein Marker |
500 µl |
|
BP3600 |
EZ-Run protein marker |
500 µl/ 500 µl x 2 |
|
BP2578-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; 1kb DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2576-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; Mid Range DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2580-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; 24kb Max DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2570-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; 50 bp Mini Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2572-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; Low Range DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
|
Barwniki |
|
|
21351 |
Stains-all, 97%, pure |
25 mg/1/5 g |
|
BP3620 |
EZ Run protein gel staining solution |
1/4 l |
|
BP1302-10 |
Ethidium bromide, 1% Solution/Molecular Biology |
10 ml |
Elektroforeza pozioma
Jest rodzajem elektroforezy w którym nośnik umieszczony jest w płaszczyźnie poziomej. Zaleta tego rozwiązania jest brak wycieków elektrolitu oraz możliwość łatwego odprowadzenia ciepła generowanego w trakcie przepływu prądu. Używana jest standardowo do rozdziału kwasów nukleinowych, a jako nośnik wykorzystuje się agarozę.
Agaroza to polisacharyd będący polimerem pochodnych galaktozy, otrzymywany przez oczyszczanie z agaru jadalnego. Agaroza jest łatwo rozpuszczalna w wodzie, w temperaturze pokojowej odwracalnie tworzy żel. Temperatura przejścia żelu w zol (potocznie topnienie agarozy) jest wyższa od temperatury zestalania.
Elektroforeza DNA w żelu agarozowym jest standardową metodą pozwalającą rozdzielić, zidentyfikować lub oczyścić fragmenty DNA. Do zalet tej metody należy zaliczyć jej prostotę a także możliwość bezpośredniej lokalizacji fragmentów DNA w żelu przy pomocy barwnika interkalującego – bromku etydyny. Coraz częściej stosuje się także barwniki fluorescencyjne, które są bezpieczniejsze w użyciu od bromku.
Aparaty (http://argentalab.pl/poziome-aparaty-do-elektroforezy-owl-easy-cast-thermo-scientific/ )
Standardowo dostarczany zestaw zawiera: komorę buforową, tacę żelową (saneczki), pokrywę, zestaw grzebieni oraz kable zasilające.
|
Model |
Wymiar żelu |
Max. ilość grzebieni |
Ilość prób |
Objętość buforu |
|
B1A |
8 x 7 cm |
X 2 |
5 – 24 |
400 ml |
|
B1 |
11 x 9 cm |
X 2 |
5 – 34 |
600 ml |
|
B2 |
14 x 12 cm |
X 2 |
8 – 48 |
800 ml |
|
B3 |
14 x 12 cm |
X 2 |
8 – 50 |
1000 ml |
|
D2 |
14,4 x 10,2 cm |
X 2 |
10 – 80 |
600 ml |
|
D3-14 |
14 x 23 cm |
X 4 |
25 – 200 |
800 ml |
|
A6 |
25 x 23 cm |
X 10 |
25 – 500 |
3000 ml |
|
A3-1 |
40 x 23 cm |
X 12 |
25 – 600 |
4500 ml |
|
A1 |
25 x 13 cm |
X 4 |
8 – 150 |
1600 ml |
|
A2 |
25 x 20 cm |
X 4 |
8 – 432 |
2300 ml |
|
A5 |
25 x 20 cm |
X 4 |
8 – 432 |
2000 ml |
|
A2-OK |
6 x (8 x 7 cm) |
X 12 |
5 – 144 |
2300 ml |
|
D4 |
2 x (17 x 16 cm) |
X 6 |
17 – 102 |
1800 mml |
Odczynniki
|
Nr kat produktu |
Nazwa |
Opakowanie |
|
|
Agaroza |
|
|
23902 |
Agarose, for biochemistry, pure powder (Mr = - 0.17) |
25/100/500 g |
|
BP2410-100 |
Agarose, intermediate melting, (PCR grade) |
100 g |
|
BP160 |
Agarose, Low-EEO/Multi-Purpose, Molecular Biology Grade |
100/500 g |
|
BP164 |
Agarose, high gelling temperature, Protein Electrophoresis Grade |
25/100/500 g |
|
BP1356 |
Agarose broad separation range for DNA/RNA, Genetic Analysis Grade |
100/500 g |
|
|
Bufor TAE |
|
|
BP152 |
Tris base, DNase RNase protease free, electrophoresis tested |
500g/1/5/10/25 kg |
|
BP118-500 |
Ethylenediaminetetraacetic acid |
500 g |
|
D/0452 |
Ethylenediaminetetraacetic acid, for analysis |
100/250 g |
|
A/0400 |
Acetic acid glacial, 99.7+%, for analysis, meets the specification of BP and Ph. Eur. |
500 ml/1/2,5/25 l |
|
|
Markery |
|
|
BP3601-500 |
EZ-Run™ Prestained Protein Marker |
500 µl |
|
BP3600 |
EZ-Run protein marker |
500 µl/ 500 µl x 2 |
|
BP2578-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; 1kb DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2576-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; Mid Range DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2580-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; 24kb Max DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2570-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; 50 bp Mini Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
BP2572-100 |
DNA Marker; Fisher BioReagents* exACTGene*; Low Range DNA Ladder; 100 Lanes |
100 ścieżek |
|
|
Barwniki |
|
|
21351 |
Stains-all, 97%, pure |
25 mg/1/5 g |
|
BP3620 |
EZ Run protein gel staining solution |
1/4 l |
|
BP1302-10 |
Ethidium bromide, 1% Solution/Molecular Biology |
10 ml |
W celu otrzymania szczegółowej oferty cenowej prosimy o kontakt: media@argenta.com.pl